色譜分離柱遇到基線漂移怎么辦
點(diǎn)擊次數(shù)：1944 更新時(shí)間：2022-11-10
色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱。
如果你遇到基線漂移，知道是什么問題嗎？漂移問題主要包括基線漂移和保留時(shí)間漂移。
1基線漂移
一般說來，機(jī)器剛起動(dòng)時(shí)，基線容易漂移，大概要半個(gè)小時(shí)的平衡時(shí)間，如果，你用了緩沖溶液或緩沖鹽，還有就是在低波長下(220nm)平衡時(shí)間相對會(huì)比較長，但是，如果你在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)基線漂移，則你要考慮下面的原因：
①紫外燈能量不足。
解決方法：
更換新的紫外燈；
②柱溫波動(dòng)。
解決方法：
控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱。
③流通池被污染或有氣體。
解決方法：
用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池(最好斷開柱子)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。
④流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。
解決方法：
檢查流動(dòng)相的組成，使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑。
⑤樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)(高K'值)以饅頭峰樣被洗脫出，從而，表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。
解決方法：
使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間。在分析過程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。
⑥檢測器沒有設(shè)定在最大吸收波長處。
解決方法：
將波長調(diào)整至最大吸收波長處；
⑦流動(dòng)相的pH值沒有調(diào)節(jié)好。
解決方法：
加適量的酸或堿調(diào)至最佳pH值；
2保留時(shí)間漂移
保留時(shí)間重現(xiàn)是液相性能好壞的一個(gè)重要標(biāo)志，同一種東西，兩次的保留時(shí)間相差不要超過15s，超過了半分鐘可看做保留時(shí)間漂移，就無法進(jìn)行定性，你要考慮以下原因：
①溫控不當(dāng)。
解決方法：
調(diào)好柱溫，檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱。
②流動(dòng)相比例變化。
解決方法：
檢查四元泵的比例閥是否有故障。
③色譜柱沒有平衡。
解決方法：
在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱。
④流速變化。
解決方法：
重新設(shè)定流速。
⑤泵中有氣泡。
解決方法：
從泵中除去氣泡。
3峰型異常問題
峰型問題是液相的主要問題，在做液相過程中，我們就是要變換不同的條件來改善不好的峰型，對于各種各樣的異常峰，要區(qū)別對待，從主要問題出發(fā)，一個(gè)一個(gè)加以解決。
①所有峰均為寬峰。
解決方法：
系統(tǒng)未達(dá)到平衡；
溶解樣品的溶劑極性比流動(dòng)相差很多；
色譜柱尺寸及類型選擇不正確；
色譜柱或保護(hù)柱被污染或柱效降低；
溫度變化造成的影響。
②所出峰比預(yù)想的小。
解決方法：
樣品黏度過大；進(jìn)樣品故障或進(jìn)樣體積誤差；檢測器設(shè)置不正確，定量環(huán)體積不正確；檢測池污染；檢測器燈出現(xiàn)問題。
③色譜圖中未出峰。
解決方法：
系統(tǒng)未進(jìn)樣或樣品分解；
泵未輸液或流動(dòng)相使用不正確；
檢測器設(shè)置不正確；
針對以上情況成因作相應(yīng)調(diào)整即可。
④一個(gè)峰或幾個(gè)峰是負(fù)峰。
解決方法：
流動(dòng)相吸收本底高；進(jìn)樣過程中進(jìn)入空氣；樣品組分的吸收低于流動(dòng)相。
⑤所有峰均為負(fù)峰。
解決方法：
信號電纜接反或檢測器輸出極性設(shè)置顛倒；
光學(xué)裝置尚未達(dá)到平衡。
⑥出現(xiàn)雙峰或肩峰。
解決方法：
進(jìn)樣量過大；樣品濃度過高；
保護(hù)柱或色譜柱柱頭堵塞；
保護(hù)拄或色譜柱污染或失效；
柱塌陷或形成短通道。
⑦前伸峰。
解決方法：
進(jìn)樣量或樣品濃度高；
溶解樣品的溶劑較流動(dòng)。
